离子交换色谱法测定重组人血清白蛋白干扰素α2b融合蛋白纯度

目的:建立并验证应用离子交换色谱(IEC-HPLC)测定重组人血清白蛋白干扰素α2b融合蛋白(r IFNα2b-HSA)纯度的方法。方法:IEC-HPLC色谱条件:TSKgel Q-STAT色谱柱(3.0 mm×10 cm);流动相A液为Tris(HCl)缓冲液,B液为Tris(HCl)Na Cl缓冲液;柱温25℃;流速0.5 mL·min-1;进样体积20μL;检测波长214 nm;梯度洗脱条件:0～3 min,100%A;3～18 min,100%A→0%A;18～21 min,0%A;21～22 min,0%A→100%A。对该方法的系统适用性、专属性、线性、精密度及定量限进行考察,并与反相色谱法、电泳法纯度测定结果进行比较。结果:系统适用性:IEC-HPLC法杂质与主峰的分离度>1.5,理论塔板数>20 000;专属性:用Na OH溶液对供试品进行处理,主峰与杂质峰分离度良好;线性范围为0.05～1 mg·m L-1(R2=0.997 4);方法精密度(RSD)为0.52%(n=6);定量下限为0.001 8 mg·m L-1;用3种方法对3批样品进行纯度测定,结果均大于99.0%。结论:对该方法进行方法学研究,其结果均符合2015年版《中华人民共和国药典》三部《药品质量标准分析方法验证指导原则》相关要求,适用于r IFNα2b-HSA的纯度测定。