目的: 建立HPLC-MS/MS 法同时测定山银花中7 个有机酸(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,4-二-O-咖啡酰奎宁酸、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸和4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸)的含量,并对其在3 种不同植物来源的药材中的含量进行比较。方法: 采用Shiseido Capcell Pak-C18 色谱柱(4.6 mm×250mm,5 μm),以0.1% 甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,流速为1 mL·min-1,加柱后分流器,使约30% 洗脱液进入质谱仪,柱温30 ℃,进样量5 μL;质谱采用ESI-多反应监测(MRM)模式扫描,以水杨酸为内标,脱溶剂温度350 ℃,脱溶剂气流(N2)600 L·h-1,雾化器压力0.2 MPa,毛细管电压4 kV。结果: 新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,4-二-O-咖啡酰奎宁酸、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸和4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸质量浓度分别在0.032~32.224 μg·mL-1(R2=0.999 5)、0.168~16.800 μg·mL-1(R2=0.999 4)、0.038~15.104 μg·mL-1(R2=0.999 8)、0.010~4.064 μg·mL-1(R2=0.999 2)、0.013~5.372μg·mL-1(R2=0.999 5)、0.079~39.840 μg·mL-1(R2=0.999 5)和0.041~16.208 μg·mL-1(R2=0.999 3)范围内线性关系良好;定量限(LOQ)为10.0~19.9 ng·mL-1,平均回收率在94.01% 和105.0% 之间。样品测定结果显示,山银花中绿原酸和3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸含量较高,分别为1.262%~7.408% 和0.636%~4.803%;咖啡酸含量较低,为0.003%~0.022%。通过比较不同植物来源的样品,发现其在有机酸的含量和比例方面存在较大差异。结论: 本实验建立的方法灵敏、准确,可用于山银花药材中有机酸的含量测定,测定结果可为该药材质量标准的完善提供依据。
