CESI-MS/MS和NanoLC-MS/MS技术对促红细胞生成素中糖肽的分析

目的:使用无鞘液毛细管电泳-质谱联用(CESI-MS/MS)和纳升液相色谱-质谱联用(NanoLCMS/MS)2种方法,对高糖基化蛋白促红细胞生成素(EPO)的糖肽进行分析,并对2种方法的分析结果进行对比。方法:以EPO为研究对象,还原烷基化后用胰蛋白酶进行酶切,酶切得到的肽段利用CESIMS/MS和NanoLC-MS/MS检测方法进行分离鉴定。CESI-MS/MS分析方法:采用熔融的石英毛细管,以10%醋酸水溶液为背景电解质,在34.5 kPa压力下进样60 s,分离电压为30 kV,同时施加正向压力6.9kPa;离子源温度为50℃,喷雾电压为1 650 V,MS扫描范围为m/z 350～1 250,MS/MS扫描范围为m/z 100～1 500。NanoLC-MS/MS分析方法:采用YMC C18色谱柱,以含0.1%甲酸的水溶液(A)-含0.1%甲酸的乙腈溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速5μL·min-1;离子源温度300℃,喷雾电压为+5 500 V,MS扫描范围为m/z 350～1 250,MS/MS扫描范围为m/z 100～1 500。将采集到的质谱数据导入到软件BiopharmaViewTM3.0中进行搜库检索,对糖肽进行鉴定。结果:采用CESI-MS/MS方法可以单独鉴定到32条糖肽,采用NanoLC-MS/MS方法可以单独鉴定到40条糖肽;通过2种方法可以共鉴定到84条糖肽,共涉及56种糖型。对比2种方法的结果,发现对于EPO糖肽的分析,CESI-MS/MS方法可以鉴定到更多的含唾液酸的糖肽,并表现了更优异的分离效果。此外,CESI-MS/MS方法鉴定出的糖肽分子量范围更宽,可以有效分析NanoLC-MS/MS方法中未鉴定到的高分子量糖肽。结论:在糖蛋白的分析中,通过糖肽水平的分离和鉴定,可以获得糖基位点和糖基序列的信息。CESI-MS/MS方法和NanoLC-MS/MS方法提供了互补的分析结果,其联合使用可鉴定出更多种类的糖肽,为糖蛋白的研究中糖肽水平的分析提供了更全面的解决方案。