分子体积排阻高效液相色谱法测定低浓度重组人源化抗BCMA/CD3双特异性抗体药物的浓度

目的:建立定量测定溶剂中低浓度重组人源化抗BCMA/CD3双特异性抗体药物浓度的分子体积排阻高效液相色谱法（SEC-HPLC法）。方法:采用TSKgel G3000SWxl（7.8 mm×300 mm,5μm）体积排阻色谱柱,高效液相紫外检测器在214 nm处测定抗体药物吸收度。对SEC-HPLC法进行专属性、系统残留、线性、精密度、稳定性方法学验证,并使用该方法和紫外-可见分光光度法测定样品浓度,进行准确度分析。结果:SEC-HPLC法对抗体药物浓度的测定无干扰;在0.01～0.32 mg·mL-1浓度范围内,SECHPLC法线性良好（相关系数R2=1.000）;不同实验者不同时间使用该方法可准确测定抗体药物浓度,RSD均≤2.0%,回收率均处于90.0%～110.0%之间;-80℃反复冻融和2～8℃存放24 h后,SEC-HPLC法仍能准确测定抗体药物浓度,稳定性良好（RSD≤2.0%）。SEC-HPLC法能准确测定样品浓度,RSD≤2.0%,回收率均处于90.0%～110.0%之间,而紫外-可见分光光度法不能准确测定低浓度(0.01 mg·m L-1)样品的浓度,RSD为5.7%,回收率为131.6%。结论:SEC-HPLC测定浓度法准确性和精密度良好,能准确测定溶媒剂中0.01～0.32 mg·mL-1范围内抗体药物浓度,能避免紫外-可见分光光度法测定0.01 mg·mL-1样品不准确的局限性,可作为测定低浓度重组人源化抗BCMA/CD3双特异性抗体药物浓度的有效方法之一。