UPLC-MS/MS同时测定大鼠血浆中他莫西芬与其主要活性代谢物及药动学研究

目的：建立超高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中他莫西芬及其2种主要活性代谢物的浓度，并应用于大鼠口服他莫西芬后的药动学研究。方法：血浆样品中加入适量氘代内标，以甲醇沉淀蛋白处理后，采用UPLC BEH Shield RP18（50 mm×2.1 mm，1.7 μm）色谱柱分离，以水（含3.5 mmol·L^-1甲酸铵，甲酸调节pH至3.5）为流动相A，甲醇（含3.5 mmol·L^-1甲酸铵，甲酸调节pH至3.5）为流动相B；以0.5 mL·min^-1的流速进行梯度洗脱，柱温35 ，进样量2 μL，样品分析时间为3 min。质谱采用多反应离子监测（MRM）的扫描模式，以电喷雾离子源（ESI）在正离子电离模式下进行测定。选择性监测质荷比为m/z 372.5→72.0（他莫西芬），m/z 388.5→72.0（4-羟基-他莫西芬），m/z 374.5→58.0（4-羟基-N-去甲基-他莫西芬），m/z 377.5→72.0（他莫西芬-d₅），m/z 393.5→72.0（4-羟基-他莫西芬-d₅），m/z 379.5→58.0（4-羟基-N-去甲基-他莫西芬-d₅）。结果：他莫西芬、4-羟基-他莫西芬和4-羟基-N-去甲基-他莫西芬分别在0.956 8~382.7 ng·mL^-1、0.500 8~200.2 ng·mL^-1和0.500 4~200.2ng·mL^-1浓度内呈良好的线性关系。方法学各项指标均符合要求。药动学参数分别为T_1/2：（28.00±2.53）、（8.56±0.51）、（13.24±2.20）h，C_max：（39.97±3.24）、（2.72±0.25）、（2.55±0.13）ng·mL^-1，T_max：（3.17±0.98）、（5.50±1.23）、（12.00±0.00）h，AUC_0-t：（302.62±17.22）、（26.92±1.68）、（82.14±3.75）h·ng·mL^-1，AUC_0-∞：（344.19±16.72）、（32.22±1.50）、（88.00±4.91）h·ng·mL^-1。结论：本法经方法学验证，适用于大鼠血浆中他莫西芬及其主要活性代谢物的测定。