一测多评法结合特征图谱的新疆紫草质量控制研究

目的:采用一测多评（QAMS）与特征图谱结合的方法测定紫草中8个羟基萘醌（紫草素、β-羟基异戊酰紫草素、乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁、异戊酰紫草素）的含量,并验证方法的准确性。方法:采用HPLC特征图谱进行色谱峰定位,并以乙酰紫草素为参照物,建立其对紫草素、β-羟基异戊酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁、异戊酰紫草素的相对校正因子,用该校正因子进行相应成分的含量计算,实现一测多评;同时采用外标法测定新疆紫草中8个羟基萘醌的含量,并比较计算值与实测值的差异,以验证一测多评法的准确性和可行性。色谱条件:采用Agilent ZOBAX XDB-Eclipse色谱柱（150 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.05%甲酸水溶液（70∶30）,流速1.0 mL·min-1,柱温30℃,检测波长275 nm,进样量10μL。结果:建立新疆紫草的特征图谱,标定了8个特征峰;12批样品色谱图的相似度均大于0.90。紫草素、β-羟基异戊酰紫草素、乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁、异戊酰紫草素进样量分别在1.032～412.8μg·mL-1（r=0.999 9）、1.002～400.8μg·mL-1（r=0.999 8）、1.032～412.8μg·mL-1（r=0.999 9）、1.053～421.2μg·mL-1（r=0.999 9）、1.016～406.4μg·mL-1（r=0.999 8）、1.045～418.0μg·mL-1（r=0.999 9）、1.030～412.0μg·mL-1（r=0.999 9）和1.007～402.8μg·mL-1（r=0.999 9）范围内呈现良好线性关系;平均加样回收率（n=6）分别为98.4%（RSD=1.8%）、97.9%（RSD=1.9%）、98.6%（RSD=1.2%）、99.3%（RSD=1.6%）、101.1%（RSD=1.9%）、98.6%（RSD=1.3%）、99.0%（RSD=1.2%）和100.4%（RSD=1.4%）。紫草素、β-羟基异戊酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁、异戊酰紫草素相对于乙酰紫草素的相对校正因子分别为1.263、1.161、0.938、1.840、1.039、1.138和0.932;且在不同实验条件下重现性良好（RSD<3.0%）;一测多评法的计算结果与外标法实测值之间无显著差异。12批新疆紫草中紫草素、β-羟基异戊酰紫草素、乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁、异戊酰紫草素的含量范围分别为0.063%～0.222%、0.011%～0.053%、0.571%～1.621%、0.105%～0.364%、0.011%～0.059%、0.349%～0.727%、0.578%～1.353%和0.720%～1.761%。结论:建立的一测多评法结合特征图谱可用于新疆紫草中8个羟基萘醌类化学成分的含量测定,有效控制新疆紫草质量。